Publisher's Synopsis
Die humane Proteinkinase CK2 ist ein Enzym, dessen Aktivitat in einer Vielzahl von Tumoren erhoht ist. Es wird als Zielmolekul fur neuartige Cytostatika diskutiert. In der vorliegenden Dissertation wurden Strategien erarbeitet, um Inhibitoren der CK2 moglichst einfach zu identifizieren. Um einen schnellen Zugang zu der CK2 zu erhalten, wurde dieses Enzym mittels Autodisplay an der Zelloberflache von Escherichia coli prasentiert. Mit Hilfe eines radiometrischen Testverfahrens konnte die Aktivitat der oberflachenprasentierten CK2 belegt und Inhibitionstestungen durchgefuhrt werden. Im zweiten Teil der Arbeit wurden Testverfahren entwickelt, die als mogliche Alternativen zu dem gangigen radiometrischen CK2-Aktivitatstest dienen sollten. Ein Testverfahren nutzt in einer gekoppelten Enzymreaktion die unterschiedliche Proteasesensibilitat eines unphosphorylierten CK2-Substratpeptid gegenuber einem phosphorylierten CK2-Produktpeptid aus. Das Peptid wurde N- und C-terminal mit einem FRET-Donor bzw. -Akzeptor markiert. Die nach Proteaseinkubation entstehende Fluoreszenz wurde als Mass fur die Proteolyse herangezogen und war umgekehrt proportional zur CK2-Aktivitat. Das zweite neu entwickelte Testverfahren fur CK2-Aktivitat basierte auf dem direkten Nachweis von Substrat und Produkt der CK2-Reaktion. Durch eine kapillarelektrophoretische Trennung und Quantifizierung von unphosphoryliertem und phosphoryliertem CK2-Substratpeptid konnte die Aktivitat der CK2 bestimmt werden. Dieses Verfahren eignete sich hervorragend zur Bestimmung von IC50 Werten. Es wurde zur Durchmusterung einer Substanzbibliothek eingesetzt, wodurch ein hochpotenter CK2-Inhibitor mit einem IC50 Wert von 0,03 muidentifiziert werden konnte.
